¿Cómo se determina la secuencia de aminoácidos de una proteína?

Hay varios métodos para hacerlo. El método tradicional consiste en tratar químicamente la proteína para romper puentes disulfuro, realizar una digestión parcial de la proteína para obtener fragmentos más pequeños, separar los fragmentos cromatográficamente y luego secuenciar usando…
¿Qué técnica es mejor para identificar una interacción proteína-proteína?

A lo largo de los años, se han desarrollado una gran cantidad de métodos para estudiar las interacciones proteína-proteína, que incluyen Y2H (híbrido de levadura 2), TAP (purificación de afinidad en tándem), Co-IP (Coinmunoprecipitación), ensayos de pull-down, etc.…
¿Cuáles son las ventajas y limitaciones de usar Western-blot vs. ELISA vs. citometría de flujo?

Creo que esta es una pregunta difícil de responder sin escribir un ensayo completo, pero traté de describir las principales diferencias de una manera un tanto simplificada: Western blot y ELISA proporcionan formas de cuantificar la cantidad de…
¿Cómo se puede hacer la proteómica de los orgánulos subcelulares?

Una forma un tanto directa es utilizar la centrifugación diferencial de la muestra para aislar organelos de masa variable. Comience con rpm muy bajas para peletizar los orgánulos más grandes como el núcleo, etc.
¿La citometría de flujo tiene diagnóstico u otras aplicaciones clínicas?

Es una parte estándar del análisis de patología clínica. Casi cualquier hospital de tamaño decente tendrá sus propias unidades de citometría de flujo. Aquí hay unos ejemplos: Hospital General de Massachusetts Patología clínica Emory Rochester Cytometry Flow and…
¿Cómo se extrae el ADN de las muestras de tejido?

Hay muchos métodos, la mayoría depende de los métodos de extracción de fenol / cloroformo, que a menudo incorporan una sal caotrópica de algún tipo. Guanidinium es común. Reactivo Trizol TRIzol®: Life Technologies es probablemente la más confiable…
¿Cuáles son algunas ventajas y limitaciones del uso de Western blot (inmunoblot) para la detección de proteínas?

Con un western blot, no solo puede aumentar enormemente la sensibilidad de su análisis (lo que le permite detectar ~ 10 x concentraciones más bajas de su proteína), sino que también detecta solo su proteína de preferencia, ignorando…
Cómo hacer un gel SDS-PAGE para Western blots sin fugas

Hay muchas marcas y configuraciones para lanzar geles, por lo que puede que no haya una técnica que abarque todo. Pero una vez trabajé brevemente en un laboratorio afortunado donde había un estudiante trabajador que limpiaba y también…
¿Cuáles son algunas de las técnicas bioquímicas importantes que debe conocer un estudiante de bioquímica?

Guau. Un montón. Dependiendo de cómo te quieras especializar. Pero las técnicas básicas que los estudiantes aprenderán (en diversos detalles) son probables: Biología Molecular: Reacción en cadena de la polimerasa Electroforesis en gel de agarosa Clonación molecular Ciencia…
¿Por qué una proteína de 30 kDa pasa a través de un cassette de fibra hueca de 5 kDa, pero no pasa a través de un filtro de membrana del mismo material?

Esta es una observación bastante común durante la filtración de proteínas. Dos razones probables: 1. Las proteínas son moléculas flexibles. Imagine una bola hecha de gelatina: una proteína globular sería algo así, pero con un poco más de…