¿Por qué obtengo múltiples bandas en SDS PAGE (en un amplio rango de 20 kD a 150 kD), cuando hay pico único en la filtración en gel?

Esto no es inusual Las bandas múltiples podrían deberse a:

• Tu proteína forma un oligómero que se deshace cuando la proteína se desnaturaliza mediante SDS. [1]

• Su proteína tiene múltiples cadenas unidas por enlaces disulfuro que son reducidos y quebrados por Mercapto-etanol en el buffer de carga de gel

¿Cómo se diferencia la diferencia entre los dos? Prepare el tampón de muestra sin el mercaptoetanol. Si aún ves múltiples bandas, la proteína está formando un oligómero. Para confirmar las bandas disulfuro dentro de un oligómero, ejecutar el gel nativo Herschel sin SDS sugiere pero con mercapto-etanol.

Notas a pie de página

[1] http://onlinelibrary.wiley.com/d …

Puede haber muchas razones para esto

1. Puede ser después de la filtración en gel que tu proteína se está degradando. Agregar un poco de glicerol o PMSF / PIC después de elución ayudará.
2. Ejecute las proteínas eluidas en una página nativa y vea el perfil. Esto debería darte una idea clara de lo que está sucediendo.

Espero que esto ayude

Aclamaciones

Jeff prácticamente lo descubrió. Para confirmar esto, podrías intentar ejecutar un gel de PÁGINA nativo. Deberías obtener una banda hacia arriba en la parte superior de tu gel.