¿Cuál es el mejor ensayo para determinar la afinidad de unión de las proteínas A y B, donde la proteína A se clona y expresa en células de mamíferos y la proteína B se regula positivamente en respuesta a la expresión heteróloga de A?

A lo largo de los años, se han desarrollado una gran cantidad de métodos para estudiar las interacciones proteína-proteína, que incluyen Y2H (híbrido de levadura 2), TAP (purificación de afinidad en tándem), Co-IP (Coinmunoprecipitación), ensayos de pull-down, etc. enfoques tiene sus propias fortalezas y debilidades, especialmente con respecto a la sensibilidad y especificidad del método.

La interferometría de bi-capa es una técnica bien establecida y libre de etiquetas ópticas para estudiar las interacciones biomoleculares. Analiza el patrón de interferencia de la luz blanca reflejada desde dos superficies: una capa de proteína inmovilizada en la punta del biosensor y una capa de referencia interna. Cualquier cambio en el número de moléculas unidas a la punta del biosensor provoca un cambio en el patrón de interferencia que puede medirse en tiempo real, proporcionando información detallada sobre la cinética de asociación y disociación de las moléculas de las dos moléculas, así como la constante de afinidad para la interacción de proteínas (ka, kd y Kd).

Por favor, consulte el análisis de interacción biomolecular para más detalles.