¿Cuál es la mejor guía para la caracterización de anticuerpos monoclonales para el mercado estadounidense?

La FDA brinda muy buenas instrucciones sobre lo que esperan de un nuevo anticuerpo monoclonal (AcM) si desea que se apruebe en el mercado de EE. UU.

Hay dos documentos de la FDA a los que se hace referencia en gran medida para la fabricación, el desarrollo y la aprobación de anticuerpos. Son:

1. Puntos a Considerar en la Fabricación y Prueba de Productos de Anticuerpos Monoclonales para Uso Humano
2. Puntos a considerar en la caracterización de líneas celulares utilizadas para producir productos biológicos

El primero es esencialmente un manual de instrucciones paso a paso de 50 páginas que le dice exactamente lo que la FDA espera que ponga en su IND y BLA. Si no lo haces, será mejor que tengas una buena excusa. Ignorando el hecho de que los dos documentos fueron escritos en 1997 y 1993, son sorprendentemente minuciosos y fueron escritos por la gramática nazi, por lo que es increíblemente claro cuáles son sus recomendaciones. Repasemos el documento, ¿o sí?

El documento está dividido en 3 capítulos, Product Manufacturing, Preclinical Studies y Clinical Trials

II Fabricación de productos

B.1 Cubre líneas celulares como una adición a “Caracterización de líneas de células”. La información importante incluye:

1. Fuente, nombre y caracterización de la línea parental.
2. Especie, cepa animal y origen de la célula inmunitaria.
3. Procedimiento para crear la línea celular
4. La fuente del inmunógeno para generar el anticuerpo
5. El esquema de inmunización
6. Procedimiento de cribado
7. Procedimiento para crear el banco de células maestro (MCB)
8. Si se usa tecnología recombinante (que casi todos hacen excepto los transgénicos), descripción del vector, proceso de transfección / transformación, procedimiento de subclonación, determinación de la secuencia de ADN y demostración de clonalidad.
9. Descripción del procedimiento para mantener el banco de células maestro.

La sección 8 es probablemente la parte más difícil de la aplicación.

B.2. Cubre el cultivo celular. La información importante incluye:

1. Descripción de los protocolos de cultivo
2. Descripción de los medios de cultivo
3. Descripción del plan de control de contaminación
4. Criterios de aceptación del sobrenadante para el procesamiento posterior

La orientación general es que 4 se hace usando un enfoque QbD.

B.3. Cubre el cultivo de células en transgénicos.

1. Descripción del programa de monitoreo de la salud animal
2. Protocolos de producción de ascitis
3. Descripción de los materiales y métodos de transferencia de genes
4. Descripción de conversaciones con CBER

B.4. Cubrir el proceso de purificación.

1. Los esquemas deberían incluir la eliminación de proteínas animales, materiales, ADN, endotoxinas, pirógenos, constituyentes de los medios de cultivo, elementos lixiviables de las columnas y virus.
2. Pasos específicos para eliminar retrovirus. La orientación es tener 2 pasos de inactivación viral ortogonal.
3. Demostración de la capacidad de eliminar virus adventicios mediante un estudio de eliminación viral.
4. Límites en los ciclos de purificación
5. Demostración de la comparabilidad del producto.
6. Descripción de suites de purificación

B.5. Caracterización de MAb purificado.

1. Integridad estructural de la proteína Demostrado por SDS-PAGE, IEF, HPLC y Mass Spec para mostrar que no hay fragmentación, agregación o modificación postraduccional inesperada
2. Especificidad Demostrado por un ensayo vinculante. Un mecanismo de acción ayuda significativamente.
3. Potencia. Demostrado por un ensayo vinculante, serológico, animal o funcional.

Esta es una gran área en la que el desarrollo del ensayo puede hacer o deshacer un programa MAb. Exigir estudios en animales para demostrar la potencia es en gran medida no preferido.

Hay secciones adicionales sobre el control de calidad

C.1. Calificación de línea celular
Para demostrar la seguridad y reproducibilidad de la línea celular, se recomiendan varias pruebas. Hay un lenguaje particular sobre la contención viral. Además, deben probarse los bancos de células de final de producción (EPCB) y los EPCB en el límite demostrado de la edad celular in vitro (LIVCA).

La Tabla 1 resume las diversas pruebas

C.2. Supervisión de calidad de lote a lote
Para demostrar el control de calidad sobre la fabricación del AcMo, se recomiendan las siguientes pruebas de bioseguridad en las diversas etapas de la producción de sustancia farmacológica y producto farmacéutico.

En el lenguaje de la BLA, se esperan límites y los estudios de eliminación deben diseñarse de manera que si hay contaminación detectable en la masa no procesada, el material debe eliminarse para cuando llegue a la sustancia farmacológica purificada y al producto final. Las pruebas se describen en la Tabla II

C.3. Estabilidad
El producto puede estar bien cuando se prueba, pero ¿qué ocurre cuando llega a su fecha de vencimiento? Deben demostrarse los datos relacionados con la demostración de la estabilidad de la vida del mercado.

1. Descripción del programa de prueba de estabilidad
2. Inclusión de pruebas de estabilidad que demuestren actividad biológica
3. Estudios acelerados de estabilidad y estudios de degradación forzada a mayor temperatura

C.4. Retroviral clearance
La mayoría de las líneas celulares utilizadas para la producción de MAb tienden a ser de origen murino. Como resultado, tienen varios retrovirus murinos. Como resultado, la contaminación retroviral se debe medir utilizando TEM para obtener una línea base. Posteriormente, se deben realizar estudios de adición para demostrar el aclaramiento retroviral.

C.5. Estudios de eliminación viral

1. Los estudios de aprobación deberían diseñarse para demostrar cuantitativamente el nivel de reducción viral, incluidos los ensayos de infectividad.
2. El análisis estadístico se explica en esta sección y también en Q5A.

C.6 Estudios genéricos de eliminación viral
Esta sección define los estudios de eliminación viral graves que pueden realizarse y cómo deben documentarse dichos estudios.

La Sección D describe los datos clave que deben realizarse antes de los ensayos clínicos. Esto incluye la discusión sobre el análisis de riesgo-beneficio que incluye el método de producción, la gravedad de la enfermedad, los efectos secundarios, la disponibilidad de tratamientos alternativos y el diseño de prueba.

Para los casos de emergencia (probablemente lo que se hizo para los ensayos con anticuerpos contra el Ébola), al menos se deben realizar esterilidad, pruebas virales adventicias y pruebas retrovirales.

La Sección E analiza los cambios de fabricación y la comparabilidad

E.1. Discute la estrategia general para hacer la comparabilidad de los productos, especialmente durante el escalado de procesos y la transferencia de tecnología. Esto incluye la estrategia de desarrollo del producto. La caracterización in vitro y fisioquímica se debe realizar para comparar el producto. Si las cosas se ven lo suficientemente diferentes, es posible que sea necesario realizar estudios en animales o ensayos clínicos para demostrar la comparabilidad.

III Estudios preclínicos específicos

La Sección A cubre la reactividad cruzada.
Debido a la forma en que se desarrollan los MAbs, existe la posibilidad de efectos importantes fuera del objetivo y se deben realizar diversas pruebas para demostrar la falta de reactividad cruzada con el tejido humano.

A.1. Pruebas in vitro
Se proporciona una lista de tejidos para analizarse mediante inmunohistoquímica. Se deben usar concentraciones de diferencia.

A.2. Prueba in vivo
Dependiendo del mecanismo de acción, como ADCC e inmunoconjugados, se deben realizar estudios en animales.

La Sección B cubre estudios preclínicos y toxicológicos
El objetivo de los estudios en animales es encontrar toxicidades potenciales, encontrar posibles efectos adversos y determinar una posible dosis. La sección discute las brechas potenciales de los ensayos preclínicos y cómo el diseño debe parecerse a la estrategia para diseñar los ensayos clínicos.

B.2. Toxicología animal

1. Si el MAb no está conjugado y no existe ningún animal y no parece existir reactividad cruzada, no se requieren estudios de tox.
2. Las dosis altas son útiles para estudiar el efecto pharococodinámico en un modelo.
3. El antígeno animal debe ser comparable al antígeno humano y deben tenerse en cuenta las diferencias en la bioquímica.
4. Se deben estudiar los efectos reproductivos si el medicamento es para uso crónico

B.3. Farmacología
Los estudios particulares se mencionan en esta sección. Los estudios de PD / PK deben incluir

1. Relación de dosis vs. AUC
2. Estudios de disociación de asociación.
3. Biodistribución para identificar los efectos potenciales fuera del objetivo
4. Impacto de los CQA como la glucosilación
5. General ADME
6. Los estudios idealmente deberían estar en un modelo animal representativo
7. Los primates no humanos se pueden usar si tienen un antígeno representativo
8. Los modelos murino y xenógrafo son buenos para estudiar modelos tumorales.
9. El material preclínico debe reflejar el material FIH y PPQ.
10. Radiomarcado para determinar T_max, C_max, T_1 / 2 y AUC
11. Consideración de las regiones Fc y el proceso de humanización en los estudios

IV ensayos clínicos

Sección A Diseño de Fase 1 y Fase 2

A.1. General
La Fase I generalmente debe ser un ensayo de escalada de dosis para determinar la dosis óptima de fijación (OBD) basada en los datos de PK / PD con el objetivo de identificar la dosis máxima tolerada (MTD). Por lo general, los sujetos de la fase 1 deben ser pacientes clínicamente relevantes. En esta etapa, las reacciones inmunes se deben controlar en gran medida.

Los efectos secundarios monitorizados de alta prioridad deberían incluir:

1. Síndrome de fuga capilar
2. Problemas de riñon
3. Problemas de hígado
4. Problemas musculares
5. Activación del sistema de complemento
6. Problemas asociados con ADCC
7. Tormentas de citoquinas
8. Anafilaxia
9. Reacciones infusionales como escalofríos, escalofríos, dolores y fiebre
10. Enfermedad del suero
11. Muerte

El único momento en que se deben usar voluntarios sanos es:

1. La población de pacientes objetivo tiene un nivel anormal del antígeno que produce problemas de tox.
2. La población de pacientes objetivo está tan enferma que no se pueden recopilar de manera confiable datos de seguridad.

La dosificación única versus multidosis se debe considerar solo cuando sea necesario durante una fase I de prueba.

A.2 Ajuste de dosis
Idealmente, la dosis inicial se determina a partir de los datos preclínicos. Las primeras pruebas deben ser exclusivamente ensayos de dosis única. Los ensayos de multidosis deben estar justificados. Después de la primera dosis, se deben confirmar los estudios de tox relevantes.

Los estudios PK deben incluir:

1. Determinación de la concentración plasmática (C), distribución y aclaramiento
2. Relación de dosis con ADME
3. Determinación de la tasa de eliminación
4. Identificación de los órganos donde ocurre DME
5. Relación entre el modo de administración y E.

Sección B Inmunogenicidad
Se debe poner mucho énfasis en identificar posibles anti-anticuerpos. La recolección de muestras está guiada por el régimen de dosificación y el tipo de MAb utilizado. Idealmente, se usa una prueba clínicamente aprobada para la identificación de anti-MAbs.

Debido a los problemas con los anti-MAbs, los ensayos clínicos deben realizarse solo cuando esté disponible la atención de reanimación aguda. Los signos vitales deben controlarse durante al menos una hora después de la administración.

Sección C Diseño de fase 3
La guía simplemente sugiere que hable con la FDA, pero tenga en cuenta la forma en que los lotes de fabricación pueden afectar su medicamento.

En resumen:
Haga todas estas cosas y la FDA podría aprobar su medicamento .

La alta tasa de aprobaciones de productos, combinada con la creciente adopción de anticuerpos terapéuticos en las economías en desarrollo influye positivamente en el crecimiento del mercado mundial de anticuerpos, con ingresos totales que superarán los 105 millones de dólares EE. UU. En 2016. Aprobación de productos de anticuerpos monoclonales, incluidos anticuerpos terapéuticos los conjugados de fármacos y los fragmentos de anticuerpos en los principales mercados de EE. UU., Europa y Japón han reforzado el crecimiento del mercado global de anticuerpos. La disponibilidad de agentes terapéuticos de anticuerpos biosimilares de bajo costo también está reforzando el crecimiento del mercado de anticuerpos.

Si bien las perspectivas a corto y largo plazo en el mercado global de anticuerpos siguen siendo positivas, los efectos secundarios asociados con el tratamiento con anticuerpos y el fracaso de los fármacos en investigación en las últimas etapas del desarrollo pueden plantear desafíos para la adopción generalizada. La administración de anticuerpos se ha relacionado con la enfermedad del suero y la anafilaxia aguda, lo que plantea desafíos para la adopción generalizada.

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