Hay muchos buenos recursos que explican el principio del ensayo de BCA o el ensayo de ácido bicinchoninic. Voy a copiar y pegar desde el análisis de ácido Bicinchoninic de wikipedia aquí:
- Los enlaces peptídicos en la proteína reducen los iones Cu2 + del sulfato de cobre (II) a Cu +. La cantidad de Cu2 + reducida es proporcional a la cantidad de proteína presente en la solución.
- A continuación, dos moléculas de ácido bicinchoninic se quelan con cada ion Cu +, formando un producto de color púrpura que absorbe fuertemente la luz a una longitud de onda de 562 nm.
ThermoFisher ofrece una explicación más detallada aquí: Química de los análisis de proteínas (aquí es de donde saqué las siguientes ilustraciones).
En el paso 1, la reducción de Cu2 + se denomina reacción de biuret. Puede ver a continuación que el Cu2 + se reduce por el átomo de nitrógeno en condiciones alcalinas.
El complejo formado por Cu + y de cuatro a seis enlaces peptídicos dará un color azul claro a violeta. La intensidad del color es proporcional al número de enlaces peptídicos presentes, que luego se puede calcular midiendo la absorbancia.
En el paso 2, Cu + forma adicionalmente complejo de quelación con dos moléculas de ácido bicinchoninic (BCA). El complejo de BCA / cobre resultante da un color púrpura intenso, que podemos medir a 550-570 nm. Este paso hace que el ensayo sea 100 veces más sensible que el uso de la reacción de biuret solo.
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Una cosa a tener en cuenta es que al formar el complejo BCA / Copper en el paso 2, los enlaces peptídicos en el paso 1 ahora están libres para unirse a otro Cu +, y el ciclo continúa y el color de la muestra se oscurecerá y oscurecerá. . Por lo tanto, es importante tener estándares de concentración de proteína conocida cuando se realiza el ensayo de BCA, que debe tener la misma temperatura de incubación y el mismo tiempo de reacción que sus muestras de proteínas.
